发酵豆粕中抗原蛋白的检测
——SDS-PAGE法
SDS-PAGE溶液的配制：
30％丙烯酰胺的配制： 丙烯酰胺 30.00g
N,N’- 甲叉双丙稀酰胺 0.80g
去离子水定容至100mL
Tris-甘氨酸缓冲液(pH=8.9)：甘氨酸 12.020g
叠氮钠 0.400g
Tris 3.030g
去离子水定容至1000mL
10％过硫酸铵：将0.100g过硫酸铵溶于1.00mL去离子水中。
染色液： 考马斯亮兰R250 0.250g
甲醇 45.40mL
冰醋酸 9.20mL
水 45.40mL
脱色液： 甲醇 114.00mL
冰醋酸 18.00mL
水 118.00mL
4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl (pH=8.8) 75mL
10% SDS 4mL
蒸馏水 21mL
4×堆积胶缓冲液： 1.00moL/L Tris-HCl (pH=6.8) 50mL
10% SDS 4mL
蒸馏水 46mL
10％过硫酸铵 5mL
电泳缓冲液： Tris 3.00g
甘氨酸 14.40g
SDS 1.00g
加水定容至1L (pH=8.3)
5×样品缓冲液： 1.00moL/L Tris-HCl (pH=6.8) 0.6mL
50%的甘油 5.0mL
10%的SDS 2mL
β-巯基乙醇 0.5mL
1.0%的溴酚兰 1mL
蒸馏水 0.9mL
5％浓缩胶的配制：（总4mL）
30％丙烯酰胺 0.67mL
4×堆积胶缓冲液 1.00mL
去离子水 2.30mL
10%过硫酸铵 10μL
TEMED 5μL
16％分离胶的配制：（总10mL）
30％丙烯酰胺 5.3mL
4×分离胶缓冲液 2.5mL
去离子水 2.2mL
10%过硫酸铵 20μL
TEMED 10μL
样品的制备：
取发酵豆粕1.0000g，加入20.00mL 0.03M的Tris-HCl(pH=8.0)(包括0.01M的β-巯基乙醇)在室温下(20℃)浸泡1h后(每10min搅动一次)，10000rpm下离心20min，取上清40μL，加入10μL 5×样品缓冲液，沸水浴3min 后，进行SDS-PAGE电泳。