调节血脂作用检验方法
1 原理
用高胆固醇和脂类饲料喂养动物可形成实验性高脂血症,再给予受试物或同时给予受试物。可检测受试物对高脂血症的影响,并可判定受试物对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解或排泄产生的影响。
2 仪器及试剂
解剖器械、721分光光度计,自动生化分析仪,胆固醇、胆盐、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白HDL-C测定试剂盒。
3 动物选择及饲料
3.1 健康成年雄性(或雌、雄各半)大鼠(150-
3.2 高脂饲料
3.2.1 79%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和10%猪油;
3.2.2 93.8%基础饲料、1%胆固醇、5%猪油、0.2%胆盐。
4 受试物及剂量分组
所测受试物应根据其理化特性配成溶液或混悬液给动物灌胃,每日1次。整个试验应设有高脂对照组,三个剂量组,必要时设阳性对照组。
5 实验步骤
5.1 大鼠脂代谢紊乱模型法
在实验的环境下大鼠喂饲基础饲料观察5-10d,然后取尾血,分别测定其各项血脂观察指标的正常值。
5.2 自正式实验开始各组动物换用高脂饲料喂饲7-10d,取尾血,测定血脂以确定是否已形成高脂血症。再根据TC水平,进行随机分组,受试物经口灌胃,为期14d-28d,高脂对照组给同体积的溶剂,继续给予高脂饲料,并定期称量体重,于实验开始的第2和/或4周时,取尾血,测定血脂各项指标。
6 观察指标
必做项目:血清总胆固醇(TC)
甘油三酯(TG)
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)
选做项目:低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)
极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)
7 结果判定
在高脂血症模型成立时,TC、TG、HDL-C三项指标中任何一项阳性时,均可认为该受试物具有调节血脂的作用。
阳性判定:①与高脂模型组相比,差异有显著性,最好呈现剂量反应关系。
②TC下降>10%;TG下降>15%;HDL-C升高4mg/dL。
8 注意事项
8.1 在建立动物模型中,可因动物品系、饲养管理而影响模型的建立。
8.2 保证基础饲料的各种营养成分,必要时最好自配饲料。